ПЦР

В 1983г Кэри Муллис разработал ПЦР

ПЦР — это метод лабораторной диагностики, направленный на выявление возбудителей инфекционных заболеваний.

Untitled Slide

• Принцип ПЦР - метод амплификации (умножения) in vitro
• Основа ПЦР - комплементарное достраивание ДНК-матрицы

Стадии ПЦР

• Выделение ДНК из периферической венозной крови, различных тканей из того, что содержит ядра.
• Проведение ПЦР (в амплификаторе).
• Регистрация результатов методом электрофореза в полиакриламидном геле.

ДЕНАТУРАЦИЯ
Двухцепочечную ДНК-матрицу нагревают до 94—96 °C на
0,5—2 мин, чтобы цепи ДНК разошлись.

ОТЖИГ
Температуру понижают.
Праймеры связываются с одноцепочечной матрицей.

СИНТЕЗ ЦЕПИ ДНК
ДНК-полимераза реплицирует матричную цепь, начиная синтез второй цепи от 3'-конца праймера, который связался с матрицей, и движется вдоль матрицы, синтезируя новую цепь в направлении от 5' к 3' концу.

Гель - документирование

Компоненты для ПЦР

• Праймеры
• Смесь ДНТФ (dATP, dGTP, dCTP, dTTP).
• Термостабильная ДНК-полимераза — фермент, который катализирует реакцию полимеризации ДНК.
• Буферный раствор

Преимущества ПЦР

• Прямое определение дефекта ДНК или наличия возбудителя
• Высокая специфичность и чувствительность
• Универсальность процедуры выявления различных возбудителей