CLONACIÓN
Ácidos nucleicos

COMPARACIÓN

CLONACIÓN MOLECULAR

• Técnica in vivo
• El frangmento de ADN de interés se introduce en una célula viva.
• Técnica manual y dura varios días
• Cantidades ilimitadas.
• Amplificación de millones de pares de bases.

PCR

• Técnica in vitro.
• El ADN se replica en un tubo de ensayo.
• Técnica realizada en horas.
• Cantidad limitada.
• Amplificación menor de 3,5 kilobases.

Los vectores de clonación

Los VECTORES DE CLONACIÓN son moléculas de ADN que pueden replicarse autónomamente en una célula huésped y que permiten la inserción de ADN extraño, sin perder esa capacidad de replicación autónoma.

Características

• Origen de replicación.
• Un sitio de inserción o un sitio múltiple de clonanción de ADN extraño
• Marcador de selección.
• Marcador de identificación.

Tipos de vectores

• PLÁSMIDOS.
• BACTERIÓFAGOS.
• CÓSMIDOS.
• FAGÉMIDOS.
• CROMOSOMAS ARTIFICIALES.
• VECTORES LANZADERAS.

PLÁSMIDO
-Son moléculas circulares de ADN bicatenario extracromosómico de origen bacteriano con capacidad autónoma de replicación.
·Parámetros para la elección plásmido:
-Tamaño inserto que puede soportar.
-Número de copias del plásmido por célula que puede alcanzar tras su replicación.

BACTERIÓFAGO
-Son virus que infectan bacterias.
·El fago se adueña del la maquinaria, se replican nuevos virus y se liberan.
·Algunos pueden insertar su material genético en el cromosoma mediante recombinación (fago lambda).

CÓSMIDO
-Son vectores híbridos constituidos con parte del cromosoma del fago lambda y parte de un plásmido bacteriano.

CROMOSOMA ARTIFICIAL
-Son vectores de clonación con capacidad de transportar fragmentos de gran tamaño.

-Cromosomas artificiales bacterianos (BAC).ra (YAC).

VECTOR LANZADERA
-Son un tipo de vectores híbridos que contienen orígenes de replicación de dos hospedadores diferentes, normalmente uno de plásmido bacteriano y otro de levadura o de virus animal.

Células hospedadoras
-Son aquellas en las que se introduce el vector de clonación para su amplificación mediante replicación.

Células hospedadoras eucariotas


LEVADURAS
-Crecen de manera similar a bacterias.
-Se utilizan para cromosomas artificiales de levaduras (YAC).


CÉLULAS VEG Y ANIMALES
-Utilizados en experimentos de clonación en la inserción de genes extraños en el genoma de la célula.
-Organismos transgénicos.
-En células animales se utilizan baculovirus o retrovirus.